Direktna imunofluorecencija kao niskobudžetna metoda za ispitivanje moždanog tkiva tokom standardizacije modela neuroborelioze kod miševa soja NMRI

Selena Djuric; Verica Simin; Pavle Banović

doi:10.5937/pomc18-28991

Selena Djuric Medicinski fakultet u Novom Sadu
Verica Simin Pasterov zavod Novi Sad, Služba za mikrobiološku i drugu dijagnostiku https://orcid.org/0000-0002-0122-1062
Pavle Banović Pasterov zavod Novi Sad, Služba za prevenciju besnila i drugih zaraznih bolesti, Ambulanta za lajm boreliozu i druge bolesti koje prenose krpelji https://orcid.org/0000-0001-7902-6606

DOI: https://doi.org/10.5937/pomc18-28991

Ključne reči: NMRI miševi, neuroborelioza, Borrelia afzelii, lajmska borelioza, borelije

Sažetak

Cilj. Ispitati primenljivost direktne imunofluorescencije (DIF) za dokazivanje prisustva borelija u moždanom tkivu prilikom standardizacije animalnog modela neuroborelioze na miševima soja NMRI.

Metode. Istraživanje je sprovedeno na 15 miševa soja NMRI. Svim miševima je supkutano inokulisano 100 µl BSK-H podloge u kojoj se nalazio lokalni izolat Borrelia afzelii. Životinje su žrtvovane nakon inokulacije u III (n=4), IV (n=6) i V (n=5) nedelji, cervikalnom dislokacijom. U uzorkovanim mozgovima miševa se vršilo dokazivanje prisustva borelija direktnom imunofluorescencijom (DIF) i reakcijom lančane polimerizacije (PCR).

Rezultati. Prvi pozitivan nalaz registrovan je u III nedelji nakon inokulacije, kada su borelije uočene u 1 od 4 mozga (25%). Nakon toga se procenat pozitivnih nalaza povećavao: u IV nedelji borelije su registrovane u 3 od 6 mozgova (50%), u V nedelji u 3 od 5 mozgova (60%). Rezultati dobijeni DIF i PCR metodama su pokazali poklapanje.

Zaključak. Na osnovu preliminarnih podataka metoda DIF se pokazala kao praktična niskobučetna metoda za praćenje toka neuro-infekcije. NMRI miševi bi mogli biti pogodan soj za uspostavljanje animalnog modela neuroborelioze. Potrebno je dodatno ispitivanje radi proučavanja kinetike infekcije nervnog sistema NMRI miša nakon V nedelje od subkutane inokulacije, kao i senzitivnosti i specifičnosti DIF metode.

Biografija autora

Pavle Banović, Pasterov zavod Novi Sad, Služba za prevenciju besnila i drugih zaraznih bolesti, Ambulanta za lajm boreliozu i druge bolesti koje prenose krpelji

Afilijacija 2: Univerzitet u Novom Sadu, Medicinski fakultet Novi Sad, Katedra za mikrobiologiju sa parazitologijom i imunologijom

Reference

1. Sertour N, Cotté V, Garnier M, Malandrin L, Ferquel E, Choumet V. Infection Kinetics and Tropism of Borrelia burgdorferi sensu lato in Mouse After Natural (via Ticks) or Artificial (Needle) Infection Depends on the Bacterial Strain. Front Microbiol 2018; 9: 1722.
2. Švabić-Vlahović M. Medicinska bakteriologija. Beograd: Savremena administracija, 2008.
3. Radolf J, Caimano M, Stevenson B, Hu L. Of ticks, mice and men: understanding the dual-host lifestyle of Lyme disease spirochaetes. Nat Rev Microbiol 2012; 10(2): 87-99.
4. Cook M. Lyme borreliosis: a review of data on transmission time after tick attachment. Int J Gen Med 2014; 8: 1-8.
5. Banović P, Mijatović D, Lalošević D. Novi patofiziološki mehanizmi razvoja migratornog eritema kod lajm borelioze. Pra Med 2019; 48(3-4): 37-41.
6. Strle F, Stanek G. Clinical Manifestations and Diagnosis of Lyme Borreliosis. Curr Probl Dermatol 2009; 37: 51-110.
7. Garcia-Monco JC, Benach JL. Lyme neuroborreliosis. Ann Neurol 1995; 37: 691-702.
8. Kaiser R. Neuroborreliosis. J Neurol 1998; 245: 247–55.
9. Sallay B, Vaculová T, Derdáková M, Rusňáková Tarageľová V, Špitalská E, Škultéty Ľ. Two mice models for transferability of zoonotic bacteria via tick vector. Acta virologica 2017; 61(03): 372-6.
10. MacDonald A. Borrelia burgdorferi tissue morphologies and imaging methodologies. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2013; 32(8): 1077-82.
11. Pachner A, Delaney E. The Polymerase Chain Reaction in the Diagnosis of Lyme Neuroborreliosis. Ann Neurol 1993; 34: 544-50.
12. Fukunaga M, Okada K, Nakao M, Konishi T, Sato Y. Phylogenetic Analysis of Borrelia Species Based on Flagellin Gene Sequences and Its Application for Molecular Typing of Lyme Disease Borreliae. Int J Syst Bacteriol 1992; 46(4): 898-905.
13. Schwan T, Burgdorfer W, Schrumpf M, Karstens R. The urinary bladder, a consistent source of Borrelia burgdorferi in experimentally infected white-footed mice (Peromyscus leucopus). J Clin Microbiol 1988; 26(5): 893-5.
14. Madhusudana SN, Subha S, Thankappan U, Ashwin YB. Evaluation of a direct rapid immunohistochemical test (dRIT) for rapid diagnosis of rabies in animals and humans. Virol Sin 2012; 27(5): 299-302.
15. Garcia‐Monco J, Miller N, Backenson P, Anda P, Benach J. A Mouse Model of Borrelia Meningitis after Intradermal Injection. J Infect Dis 1997; 175(5): 1243-5.
16. Pachner A, Ricalton N, Delaney E. Comparison of Polymerase Chain Reaction with Culture and Serology for Diagnosis of Murine Experimental Lyme Borreliosis. J Clin Microbiol 1993; 31(2): 208-14.