Razvoj i validacija RP-HPLC metode za određivanje tiazotične kiseline i njegove nečistoće sa primjenom u kontroli tableta

Sažetak

U ovom radu prikazan je razvoj i validacija jednostavne i precizne RP-HPLC metode za određivanje sadržaja tiazotične kiseline i nečistoće 3-metil-1,2,4-triazol-5-tiona sa primjenom u kontroli tableta. Hromatografska analiza je izvedena korišćenjem Hypersil GOLD aQ C18 (150 x 4 mm) 3 µm kolone pod izokratskim uslovima eluiranja sa mobilnom fazom koju čine fosfatni pufer pH 3,3 i metanol u odnosu 99:1 (v/v), brzinom protoka od 1 mL/min i radnom temperaturom od 30 °C. Detekcija je vršena na 220 nm. Razvijena metoda validirana je prema ICH smernicama. Tokom validacije testirani su sledeći analitički parametri: specifičnost, linearnost, preciznost, tačnost, robusnost kao i LOQ za ispitivanu nečistoću. Metoda je linearna u opsegu koncentracija od 0,139 mg/mL do 0,238 mg/mL (r = 0,9992) za tiazotičnu kiselinu i od 0,091 µg/mL do 1,56 µg/mL (r = 0,9998) za ispitivanu nečistoću. Dokazana je dobra preciznost (RSD < 2% za tiazotičnu kiselinu tj. RSD < 10% za nečistoću), tačnost (Recovery u opseg 98–102% tj. od 70–130% za nečistoću) i robusnost metode. Ispitivana nečistoća 3-metil-1,2,4-triazol-5-tiona je detektovana u tabletama tiazotične kiseline, ali je njen sadržaj ispod limita kvantifikacije (LOQ) definisanog datom metodom (0,091 µg/mL).