UTICAJ PARAMETARA DETEKTORA NAELEKTIRSANJA U AEROSOLU NA ODGOVORE ODABRANIH ANALITA U SISTEMU MULTIMODALNE HROMATOGRAFIJE

Sažetak

S obzirom na veliku tržišnu zastupljenost farmaceutskih proizvoda koji sadrže kontra-jone (50%), analiza istih ključna je komponenta procesa razvoja leka, kontrole kvaliteta i puštanje serije leka u promet (1). Multimodalna hromatografija (eng. Mixed-Mode Chromatography, MMC) nudi mogućnost istovremene separacije katjonskih i anjonskih vrsta na jednoj koloni, pojednostavljujući time laboratorijske procese (2). Međutim, izbor tehnika za detekciju tipičnih kontra-jona veoma je sužen. Poslednjih godina, kontra-joni efikasno se detektuju uz pomoć detektora naelektrisanja u aerosolu (eng. Charged Aerosol Detector, CAD) koji generiše signal nezavisan od hemijske strukture (3). S navedenim u vezi, smatra se da upotreba MMC-CAD tehnike racionalizuje broj pojedinačnih analitičkih aktivnosti potrebnih za kontrolu kvaliteta analita i kontra-jona, smanjuje iscrpljivanje resursa i time podržava koncept održivosti u domenu savremene analitike lekova. U ovom radu proučavan je uticaj sistemskog variranja parametara CAD detektora na odgovor diklofenak-kalijuma i tramadol-hidrohlorida. Hromatografkse analize izvedene su na Acclaim ™ Mixed-mode WCX-1 (2,1 x 150 nm, 3 μm) koloni koja kombinuje hidrofobne reverzno-fazne i mehanizme slabe katjonske izmene. Zadovoljavajuće razdvajanje aktivnih farmaceutskih supstanci i njihovih kontra-jona postignuto je upotrebom 90 mM acetatnog pufera pri pH 5 (A) i acetonitrila (B). Korišćeno je izokratsko eluiranje mobilne faze (40% B), pri protoku od 0,4 mL/min. Na osnovu preliminarnih eksperimenata, sledeći faktori identifikovani su kao značajni, te su testirani pri navedenim vrednostima: temperatura isparavanja (35ºC i 50ºC), konstanta filtera (1 s, 5 s i 10 s) i vrednost stepene funkcije (0,8, 1,0 i 1,2). Rezultati su pokazali da je temperatura isparavanja imala pozitivan efekat na odnos signal/šum (eng. signal-to-noise, S/N). S druge strane, visina i površina pika značajno su se smanjili pri povećanju temperature. Ovaj nalaz ukazao je na snažnu potrebu za finim podešavanjem pomenutog parametra imajući u vidu isparljivost analita. Povećanje vrednosti konstante filtera dovelo je do boljeg izgleda bazne linije, ali i do širenja pikova. Konstanta filtera postavljena na 5 s rezultirala je najvećim vrednostima odnosa S/N. Vrednost stepene funkcije, koja je direktno modifikovala CAD signal, pokazala je očigledan negativan efekat na površinu pika. U svetlu eksperimentalnih nalaza, optimalna CAD detekcija diklofenaka, tramadola, kalijuma i hlora postignuta je pri postavkama: konstanta filtera 5 s, vrednost funkcije snage 0,8 i temperatura isparavanja 35ºC.