Određivanje ukupnih aflatoksina u žitaricama ELISA tehnikom

Sažetak

Mikotoksini su ekstracelularni metaboliti plesni, koji su toksični po ljude i životinje. Uneti u organizmu mogu da izazovu akutne ili hronične štetne efekte. Danas se za određivanje mikotoksina primenjuju različite analitičke tehnike. Najčešće se koristi ELISA tehnika (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), ali tačnije metode određivanja mikotoksina podrazumevaju primenu tečne ili gasne hromatografije sa određenom vrstom detektora. Cilj ovog rada je bio određivanje ukupnih aflatoksina ELISA tehnikom u žitaricama, pšenici i kukuruzu. Prisutni aflatoksini ekstrahovani su iz uzorka rastvorom metanola Ekstrahovani aflatoksini se dodaju konjugatu i smeša se postavlja u antitelom obložena udubljenja. Posle uklanjanja nevezanih aflatoksina dodaje se supstrat, što dovodi do razvoja plave boje (intenzitet boje je proporcionalan koncentraciji konjugovanih aflatoksina, a obrnuto proporcionalan koncentraciji aflatoksina iz uzorka). Dodavanjem kiselog ˝stop rastvora˝ boja se menja u žutu, a intenzitet boje se meri na ELISA čitaču na talasnoj dužini od 450 nm. Od 19 uzoraka pšenice, u 14 uzoraka je pokazalo vrednost ispod 3 µg/kg, a pet uzoraka vrednost od 3 do 4,55 µg/kg. Od 16 uzoraka kukuruza, 10 uzoraka je imalo vrednost aflatoksina ispod 3 µg/kg, a  dva uzorka vrednost veću od 3 µg/kg i  dva uzorka vrednost veću od 8 µg/kg. U samo jednom uzorku je vrednost MDK prekoračena i iznosi 41,22 µg/kg. MDK vrednost za pšenicu iznosi do 4 µg/kg, a MDK za kukuruz do 10 µg/kg. Rezultati dobijeni na ELISA čitaču su provereni komparativnom analizom korišćenjem setrifikovanog materijala, Fapas QC Material Data Sheet TCL0405QC, serijski broj CL0405, matrix: Maiye Flour.