Razvoj i validacija brze i jednostavne UPLC/MS metode za određivanje terapijskih i toksičnih koncentracija valproinske kiseline u plazmi pacijenata

Sažetak

Valproinska kiselina (VK) je lek iz grupe antiepileptika sa dugom istorijom kliničke upotrebe, koji se, osim u terapiji epilepsije, poslednjih decenija sve više koristi u terapiji različitih bolesti (bipolarni poremećaj, profilaksa migrene itd). Zbog značajnih interindividualnih varijacija, koncentracija VK se često određuje u svrhe terapijskog praćenja leka (TDM – Therapeutic Drug Monitoring). S druge strane, akutna trovanja ovim lekom predstavljaju značajan problem. Prema podacima Američkih centara za kontrolu trovanja došlo je do povećanja incidence trovanja VK u poslednjih 20 godina, dok izveštaji Nacionalnog centra za kontrolu trovanja u Beogradu navode VK kao jedan od tri najčešća uzročnika trovanja kada su u pitanju intoksikacije antiepilepticima. Cilj ovoga rada je razvoj savremene analitičke metode za određivanje koncentracije VK u plazmi pacijenata. Validovana je UPLC/MS metoda koja podrazumeva brzu i jednostavnu pripremu uzorka. Nakon precipitacije proteina, izvršena je ekstrakcija iz 100 µL plazme uz pomoć HLB kertridža. Kao interni standard korišćen je rastvor kaprilne kiseline. Hromatografsko razdvajanje je postignuto na C18 koloni (1,8 µm, 2,1 X 150 mm) gradijentnim eluiranjem pri konstantnom protoku mobilne faze. Postignuta je dobra rezolucija pikova (RtVK - 4,73 min, RtISTD - 4,94 min). Validacija je izvedena prema preporukama Evropske agencije za lekove, a na osnovu statističke analize je pokazano da je metoda precizna, tačna, specifična, osetljiva i potvrđena je linearnost u širokom opsegu koncentracija (1-250 mg/L). Prednosti ove metode su jednostavan način pripreme iz male količine uzorka, bez prethodne derivatizacije, i kratko vreme trajanja analize, što u potpunosti zadovoljava potrebe TDM-a i urgentnih toksikoloških analiza.