Uticaj litijum sulfata na Šenonovu entropiju hromatina kod limfocita

Sažetak

Uvod: Litijum utiče na brojne signalne puteve u ćelijama. Oni mogu pokrenuti niz fosforilacija enzima koji konačno dovode do povećane ili smanjene ekspresije gena u ćelijskom jedru. Međutim, efekat litijuma na više nivoe genske organizacije u jedru, poput hromatina još uvek nije dovoljno izučen.

Cilj rada: Određivanje uticaja litijuma na hromatinsku organizaciju u jedru limfocita putem ispitivanja promena Šenonove entropije hromatina u ovim ćelijama.

Materijal i metode: Periferna krv tretirana je litijum sulfatom dok se nisu postigle koncentracije litijuma od 1mmol/l, 2 mmol/l i 3 mmol/l.  Napravljeni razmazi su fiksirani metanolom i obojeni Felgen metodom za DNK vizualizaciju. Ćelije u razmazu su tretirane sa HCl u trajanju od 120min. Schiff-ov reagens je korišćen u procesu bojenja u trajanju od 120min i ispiranje razmaza je obavljeno 3 puta po 5min sa 6ml 10% vodenog rastvora natrijum metabisulfita. Nakon bojenja, odabran je reprezentativni uzorak od 30 limfoctnih hromatinskih struktura i za svaku strukturu je napravljen digitalni mikrograf. Kao i u našim prethodnim studijama, Šenonovu entropiju smo računali tako što se mikrograf konvertuje u format tekstnog numeričkog stringa. Hromatin limfocita je još analiziran uz pomoć metode teksturalne analize.

Rezultati: Tretman litijum sulfatom (1 mmol/l) nije doveo do povećanja vrednost entropije sa koje je bilo statistički signifikantno (p>0,05). Ipak, u uzorcima u kojima je koncentracija litijuma bila 2 i 3 mmol/l, došlo je to statistički značajnog povećanja entropije (p<0,05). Detektovan je takođe statistički značajan dozno-zavisni linearni trend povećanja hromatinske entropije u uzorcima (p<0,05). Nakon tretmana litijum sulfatom, srednja vrednost angularnog drugog momenta hromatina limfocita u kontrolnom uzorku se nije statistički značajno promenila (p>0,05). Takođe, ni inverzni momenat razlike tretiranih limfocita nije se značajno menjao (p>0,05).

Zaključak: Litijum sulfat kod limfocita periferne krvi izaziva dozno zavisno povećanje hromatinske Šenonove entropije, a sto nije praćeno sličnim promenama u teksturalnim parametrima hromatina.

Ključni pojmovi: Litijum, hromatin, limfociti, Šenonova entropija